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大腸埃希菌O157的ISO方法解讀

更新時(shí)間:2019-06-26  |  點(diǎn)擊率:1585

大腸埃希菌O157作為食品致病菌,早就引起人類(lèi)的注意。2001年,ISO發(fā)布了ISO 16654:2001食品和動(dòng)物飼料微生物學(xué)大腸埃希菌O157檢測(cè)的水平方法,對(duì)食品和飼料中的E.coli O157檢測(cè),給出了標(biāo)準(zhǔn)方法。

 

O157E.coli的血清型。我國(guó)標(biāo)準(zhǔn)要求在牛肉制品和生食果蔬制品中不得檢出。在ISO 16654:2001中,E.coli O157的檢測(cè)分為四步:

 

1)增菌。采用含新生霉素的改良型TSB肉湯,41.5℃孵育6h,再緊接著孵育12-18h;

2)分離和富集。需要采用針對(duì)O157的抗體包被的免疫磁珠;

3)檢出:采用CT-SMAC平板和另一款原理不同的選擇性分離瓊脂

4)驗(yàn)證:對(duì)CT-SMAC平板上的山梨醇陰性菌落和第二款選擇性分離瓊脂上的E.coli O157典型菌落,通過(guò)吲哚試驗(yàn)和E.coli O157抗血清的凝集試驗(yàn)進(jìn)行驗(yàn)證。

 

增菌階段,ISO推薦用Modified tryptone soya broth,即改良型TSB肉湯,對(duì)此,HIMEDIA生產(chǎn)有Soyabean Bile Broth Base(貨號(hào)M1286)和新生霉素添加劑(貨號(hào)FD290),配方和ISO推薦的改良型TSB肉湯*一致,可以采用。

 

對(duì)于CT-SMAC瓊脂,HIMEDIA也生產(chǎn)有相應(yīng)培養(yǎng)基(貨號(hào)M1340,加添加劑,貨號(hào)為FD147),培養(yǎng)結(jié)果見(jiàn)下圖。O157為無(wú)色菌落。但不排除假陽(yáng)性,如假單胞菌在此培養(yǎng)基中也可產(chǎn)生無(wú)色菌落。此時(shí)可進(jìn)行氧化酶試驗(yàn),在5-10秒內(nèi)觀察結(jié)果。假單胞菌為陽(yáng)性,而O157為陰性。

20190624

 

同時(shí),ISO 16654:2001也指出,存在山梨醇陽(yáng)性的E.coli O157不會(huì)被CT-SMAC平板檢測(cè)到。因此推薦同時(shí)使用另外一款選擇分離培養(yǎng)基。此時(shí)可考慮HIMEDIA的另外一款O157選擇性瓊脂(顯色培養(yǎng)基),貨號(hào)為MV157,品名為HiCrome™ EC O157:H7 Selective Agar Base,Modified,配合添加劑(貨號(hào)FD187)一起使用。其檢測(cè)效果見(jiàn)下圖。E.coli O157:H7能旺盛生長(zhǎng),菌落呈深紫色,而普通E.coli呈藍(lán)綠色。

20190624

 

培養(yǎng)基添加劑中的亞碲酸鉀能抑制氣單胞菌和普羅威登菌生長(zhǎng),新生霉素抑制革蘭陽(yáng)性菌,月桂基硫酸鈉抑制伴隨的革蘭陽(yáng)性菌群。

 

在驗(yàn)證階段,ISO也提示,發(fā)現(xiàn)存在吲哚陰性的突變菌。因此,也可以考慮用qPCR或多種生化鑒定的方式進(jìn)行驗(yàn)證。

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